熒光定量PCR試劑盒可以有效地幫助分子生物學(xué)家了解更多不同類型的生物信息，例如細(xì)胞的繁殖和分化、基因突變、基因轉(zhuǎn)錄等方面。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)中也有著廣泛的應(yīng)用，通過熒光探針法運(yùn)用PCR技術(shù)，不僅在基因定量、基因表達(dá)、突變檢測、病毒檢測等領(lǐng)域取得了很多成果，更在臨床抗菌藥物、人群基因檢測等領(lǐng)域中有著廣闊的前景。
【口蹄疫病毒A亞型熒光定量PCR儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
1.1 DNA 提取
1) 對上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液)， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心柱提取法)，請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
2. 檢測方法的局限性
a. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
b. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
c. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
d. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；
g. 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
1.1 結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗，重復(fù)試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。
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