豬藍(lán)耳經(jīng)典致病PRRSV-C/PRRSV-M雙重?zé)晒釶CR說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

商品名稱(chēng)：豬藍(lán)耳病毒經(jīng)典型/高致病性（PRRSV-C/PRRSV-M）?核酸檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光-PCR 法）

英 文 名 ：Classical/high pathogenicity (PRRSV-C/PRRSV-M) nucleic acid detection kit for porcine blue ear virus (real-time fluorescent -PCR)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

豬藍(lán)耳病毒經(jīng)典型/高致病性（PRRSV-C/PRRSV-M），是由A型流感病毒引起禽類(lèi)的一種從呼吸系統(tǒng)到嚴(yán)重全身敗血癥等多種癥狀的傳染病[1]。其中PRRSV-C/PRRSV-M，不僅可以感染禽類(lèi)，也可以感染人類(lèi)，特別是1999年以來(lái)，嚴(yán)重威脅了人類(lèi)健康、畜牧業(yè)生產(chǎn)和畜產(chǎn)品的貿(mào)易，其公共衛(wèi)生意義已引起*的廣泛關(guān)注[4]。本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，定性、定量檢測(cè)PRRSV-C/PRRSV-M，對(duì)PRRSV-C/PRRSV-M引起的流感診斷有重要指導(dǎo)意義。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒針對(duì)PRRSV-C/PRRSV-M? 基因高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針， 在反應(yīng)體系中含基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用儀器對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)    結(jié)果的定性、定量分析。

【試劑組成】

名 稱(chēng) 規(guī) 格

酶液 50μL×1 管

AIV-H9 反應(yīng)液 1.0mL×1 管

AIV-H9 陽(yáng)性質(zhì)控品 50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管

注：

1）不同批號(hào)試劑不能混用。

2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱(chēng)取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，

8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；棉拭子直接取 100

μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線丏無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，丏 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

【參考文獻(xiàn)】

[1]WEBSTER R G, BEAN W J, GORMA N O T, et al. Evolution and ecology of influenza A viruses [J] . Microbiol Rev, 1992, 56(1): 152 -179.

[2]GUO Y J, KRAUSS S, SENNE D A, et al. Characterization of the pathogenicity of members of the newly established H9N2 influenza virus lineages in Asia

[J] .Virology, 2000, 267( 2):279 -288.

[3]唐秀英, 付朝陽(yáng), 馮菊艷. H9 亞型禽流感的流行不防制[J] . 預(yù)防獸醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2000, 2( 4): 1-3.

[4]郭元吉, 李建國(guó), 程小雯, 等. 禽 H9N2 亞型流感病毒能感染人的發(fā)現(xiàn)[J] . 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志, 1999, 13( 2): 105-108.

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