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購買到原代細胞之后應該注意什么事項

更新日期: 2021-04-25
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  原代細胞是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。對原代細胞最直觀的理解,就是不能無限傳代下去,不論你是自己提取的細胞還是從試劑公司購買的細胞,都會建議你在P2-P3代完成實驗是*。所以,掌握提取和培養(yǎng)原代細胞的技巧,盡可能地讓細胞的好狀態(tài)多維持幾代,對實驗成敗來說至關重要。那么對已經(jīng)購買的細胞之后應該注意什么注意事項呢
  1.  收到細胞時,要鏡下觀察是否有污染情況;收到細胞的前幾天,要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄,以防細胞出現(xiàn)問題后,可以跟公司很好地溝通。
  2.  收到細胞后,不要馬上處理。應置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急,可靜置過夜。
  3.  細胞的第一次傳代,一定要密度高一些傳代,原代細胞傳代密度低,很難長起來。建議1:2-1:3傳代。
  4.  原代細胞傳代時(內皮細胞,貼壁為例),0.25%+0.53nM的胰酶消化,1ml消化液37度培養(yǎng)箱內消化30sec,再加入5ml培養(yǎng)基(正常消化貼壁細胞,我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1,但是原代細胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶)。
  5.  原代細胞不建議凍存,因為凍存很容易復活不成功。如果要凍存的話,建議在P2或P3代凍存,凍存液中的血清越多越好,建議比例9(血清):1(DMSO)。
  6.  原代細胞復蘇時,置于37-38度水浴融化細胞,并加入10ml培養(yǎng)液(正常貼壁細胞復蘇時,也可以使用這種比例,復蘇成活率會大大提高),離心重懸鋪板。
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