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購買到原代細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么事項(xiàng)

更新日期: 2021-04-25
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  原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。對(duì)原代細(xì)胞最直觀的理解,就是不能無限傳代下去,不論你是自己提取的細(xì)胞還是從試劑公司購買的細(xì)胞,都會(huì)建議你在P2-P3代完成實(shí)驗(yàn)是*。所以,掌握提取和培養(yǎng)原代細(xì)胞的技巧,盡可能地讓細(xì)胞的好狀態(tài)多維持幾代,對(duì)實(shí)驗(yàn)成敗來說至關(guān)重要。那么對(duì)已經(jīng)購買的細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么注意事項(xiàng)呢
  1.  收到細(xì)胞時(shí),要鏡下觀察是否有污染情況;收到細(xì)胞的前幾天,要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄,以防細(xì)胞出現(xiàn)問題后,可以跟公司很好地溝通。
  2.  收到細(xì)胞后,不要馬上處理。應(yīng)置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急,可靜置過夜。
  3.  細(xì)胞的第一次傳代,一定要密度高一些傳代,原代細(xì)胞傳代密度低,很難長起來。建議1:2-1:3傳代。
  4.  原代細(xì)胞傳代時(shí)(內(nèi)皮細(xì)胞,貼壁為例),0.25%+0.53nM的胰酶消化,1ml消化液37度培養(yǎng)箱內(nèi)消化30sec,再加入5ml培養(yǎng)基(正常消化貼壁細(xì)胞,我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1,但是原代細(xì)胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶)。
  5.  原代細(xì)胞不建議凍存,因?yàn)閮龃婧苋菀讖?fù)活不成功。如果要凍存的話,建議在P2或P3代凍存,凍存液中的血清越多越好,建議比例9(血清):1(DMSO)。
  6.  原代細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),置于37-38度水浴融化細(xì)胞,并加入10ml培養(yǎng)液(正常貼壁細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),也可以使用這種比例,復(fù)蘇成活率會(huì)大大提高),離心重懸鋪板。
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